正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

淀粉是植物中糖的主要储存形式，其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都有重要意义。

测定原理：

利用 80％乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开，进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖，采用蒽酮比色法测定葡萄糖含量，即可计算淀粉含量。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、浓硫酸（不允许快递）、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：液体 35mL×1 瓶，4℃保存； 试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；

淀粉提取：

1、称取0.1~0.2g 样本（建议称取约 0.1g 样本）于研钵中研碎，加入1mL 试剂一，充分匀浆后转移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min，3000g，25℃离心 5min，弃上清，留沉淀。

2、沉淀中加入0.5mL 蒸馏水，放入95℃水浴中糊化 15min（盖紧，以防止水分散失）。

3、冷却后，加入 0.35mL 试剂二，25℃常温提取 15min，振荡 3-5 次。

4、加入 0.85mL 蒸馏水，混匀，3000g，25℃离心 10min，取上清液待测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 620nm，蒸馏水调零。

2、调节水浴锅至 95 度。

3、工作液的配制：临用前在试剂三中加入 3.75mL 蒸馏水后，缓慢加入 21.25mL 浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用；用不完的试剂 4℃保存一周；

4、样本测定：取50μL 样本和250μL 工作液至EP 管中，95 度水浴10 min（盖紧，防止水分散失），自然冷却至室温，取200uL 至微量石英比色皿或96 孔板中，在620 nm 波长下记录测定吸光度值A。

淀粉含量计算：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y =5.872x-0.0295；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr

2、按样本鲜重计算

淀粉含量(mg/g 鲜重)= [(A+0.0295)×V1] ÷5.872÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.025mL；V2：加入提取液体积，1.7 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y=2.936x-0.0295；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936 ÷(V1×Cpr)=0.34×(A+0.0295) ÷Cpr

2、按样本鲜重计算

淀粉含量(mg/g 鲜重)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936÷(W×V1÷V2) =0.578×(A+0.0295) ÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.025mL；V2：加入提取液体积，1.7 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

注意 ：由于工作液具有强腐蚀性，请谨慎操作。

若吸光值大于1，请将样本用提取液稀释后再测定，计算公式中乘以相应的稀释倍数。提取液的配置：0.35mL 试剂二+1.35mL 水。用多少按照此比例配多少。

最低检测限为 10μg/g 鲜重或 100ng/mgprot 。